
HEK293-eGFP 人胚腎細胞-綠色熒光蛋白標記
| 細胞基本屬性 | ||||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 胚胎腎 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細胞代數 | p3-p8 | |||
| 特別注意 | 該細胞貼壁不牢,運輸過程中細胞會有脫落,如細胞脫落,請離心收集,消化后重新鋪瓶 | |||
| 背景介紹 | Luciferase HEK-293細胞穩定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩定,培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢光蛋白活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。HEK-293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞,HEK-293細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出,293 HEK-293細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA,但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現,Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主,可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。 | |||
| puro藥篩濃度 | HEK293-eGFP細胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml,培養過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 | |||
| Luciferase活性檢測 | ![]() | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細胞規格 | 1x106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構 | ATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602 | |||
| 培養基 | 90% DMEM+10% FBS+PS | |||
| 培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
| 細胞貨期 | 現貨,1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發貨(T25瓶免運輸費用)/凍存發貨(需加干冰運輸費用)順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 細胞培養操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h,以便穩定細胞狀態 | 收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養 | 第三天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 首次傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL完全培養基,培養過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現象。 | 1.收貨時若發現干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存; 2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。 3.由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 | |||
| 備注:客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以撥打技術服務,我們隨時給予解答。 | ||||
| 細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加 1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 | |||





