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廣州偉伯科技有限公司
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HEK293-eGFP 人胚腎細胞-綠色熒光蛋白標記

產品編號:4186366
產品類別:國產試劑
包裝規格:1mL凍存管
市場價:詢價
優惠價:立即咨詢
細胞基本屬性
種屬來源
組織來源胚胎腎
生長特性貼壁生長
細胞代數p3-p8
特別注意該細胞貼壁不牢,運輸過程中細胞會有脫落,如細胞脫落,請離心收集,消化后重新鋪瓶
背景介紹

Luciferase HEK-293細胞穩定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩定,培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢光蛋白活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。        
HEK-293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞,HEK-293細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出,293 HEK-293細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA,但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現,Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主,可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。
puro藥篩濃度HEK293-eGFP細胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml,培養過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持
Luciferase活性檢測
生物安全等級2
細胞規格1x106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測
保藏機構ATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602
培養基90% DMEM+10% FBS+PS
培養條件氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件無血清凍存液,液氮儲存
細胞貨期現貨,1周左右
運輸方式復蘇發貨(T25瓶免運輸費用)/凍存發貨(需加干冰運輸費用)順豐快遞
供應限制僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
特別說明以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主
細胞培養操作
收貨方式T25瓶凍存管
收貨處理觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h,以便穩定細胞狀態收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇
傳代密度細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養第三天換液并檢查細胞密度
傳代比例首次傳代建議1:2傳代
1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶
傳代方法

a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。          
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。          
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL完全培養基,培養過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。
注意事項

1.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現象。

1.收貨時若發現干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存;
2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞。
到貨須知

1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。

3.由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。

備注:客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以撥打技術服務,我們隨時給予解答。
細胞凍存操作
凍存液配方無血清凍存液,液氮儲存
細胞密度待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25瓶為例
凍存方法a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加 1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案
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