Fenton反應是最常見的產生羥自由基的化學反應，H2O2的量和 Fenton反應產生的 OH·量成正比，Fenton反應生成的羥自由基與水楊酸反應，生成物在 510nm處有特殊吸收。采用固定反應時間法，根據測試物在 510nm處吸光度值的大小來判斷測試物清除羥自由基的能力。

試劑盒的組分與配制：

所需的儀器和用品：

酶標儀、96孔板、天平、水浴鍋、離心機、研缽、可調式移液器、冰、蒸餾水。

羥自由基清除能力測定：

建議正式實驗前選取 2個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！

1、樣本制備：

①組織樣本：

稱取 0.1g樣本(若是干樣可取 0.02-0.05g)，加入 1mL的 80%乙醇(自備)進行勻漿，勻漿后轉入 2mL離心管中；于 50℃，200-300W條件下超聲提取 10min(間隔 5min振蕩混勻一次)。12000rpm，離心 10min，取上清，置冰上待測。

②液體樣本：直接檢測。若渾濁，離心后取上清檢測。

2、上機檢測：

①酶標儀預熱 30min，調節波長至 510nm。

②不同樣本清除能力不一，可先選取 2個樣本做檢測，若 A測定-A對照接近零，需對樣本進行稀釋(用提取液稀釋即可)后再檢測，或降低樣本加樣量(如減至 20μL，蒸餾水相應增加)。

③在 EP管中依次加入：

結果計算：

羥自由基清除率(%)=[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100%