輔酶 Q(Coenzyme Q，CoQ)是一種生物體內廣泛存在的脂溶性醌類化合物，故又稱泛醌，在體內呼吸鏈中質子移位及電子傳遞中起重要作用，是呼吸鏈中重要的遞氫體，它是細胞呼吸和細胞代謝的激活劑，也是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強劑。對多種酶有激活作用。不同生物體來源的輔酶 Q其側鏈異戊烯單位的數目不同，人類和哺乳動物是 10個異戊烯單位，故稱輔酶 Q10。輔酶 Q10是輔酶 Q類的重要成員之一，它們與線粒體內膜相結合，廣泛參與體內的生物代謝過程。

輔酶 Q10不僅能給心臟提供動力，還具有**的抗氧化、清除自由基功能，能預防血管壁脂質過氧化，預防動脈粥樣硬化，并且無任何毒副作用。具體作用體現在以下四個方面：

①幫助保護心臟輔酶 Q10有助于為心肌提供充足氧氣，預防突發性心臟病，尤其在心肌缺氧過程中輔酶 Q10發揮關鍵性改善作用。

②保護皮膚長期使用輔酶 Q10能夠有效防止皮膚衰老，減少臉部皺紋。

③抗疲勞輔酶 Q10使細胞保持良好健康的狀態，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。它是細胞自身產生的天然抗氧化劑和細胞代謝啟動劑，具有保護和恢復生物膜結構的完整性、穩定膜電位作用，是機體的非特異性免疫增強劑，因此顯示出極好抗疲勞作用。

④防癌抗癌研究表明，輔酶 Q10有抗腫瘤作用，臨床對于晚期轉移性癌癥有一定療效。

輔酶 Q10(CoQ10)檢測試劑盒(微板法)其檢測原理是待測樣品在堿性條件下，EC取代了 CoQ10上的甲氰基，形成藍色化合物，通過酶標儀測定 620nm處吸光度值，根據標準曲線即可測出輔酶 Q10的含量。本產品可用于測定花生、牛肉、沙丁魚、保健品等食品中的 CoQ10的含量。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、無水乙醇、蒸餾水、三氯甲烷或正己烷等提取試劑

2、分光光度計或酶標儀、比色杯或 96孔板

操作步驟(僅供參考)：

1、稀釋標準品：用 EC buffer稀釋 CoQ10標準(5mg/ml)至 0.5mg/ml，-20℃保存備用。

2、準備樣品：

①新鮮動物心臟或肝臟樣品：用醇堿皂化法、溶劑皂化法等提取適量的 CoQ10提取液，-20℃保存備用。

②動物血清樣品：0.1ml血清加入 0.9ml三氯甲烷，持續搖動 30min以上，使 CoQ10充分提取出來。如果檢測結果較低，可以降低三氯甲烷的加入量。

③保健食品：參考 GB/T 22252-2008 《保健食品中輔酶 Q10的測定》中樣本的提取方法。具體如下：根據試樣中 CoQ10含量，稱取 1～5g均勻試樣(精確至 0.001g)，置于 25ml棕色容量瓶中，加正己烷 20ml，超聲提取 20min后，加正己烷至刻度，搖勻，量取 1.0ml上述溶液于 10ml棕色容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，混勻，0.45μm濾膜過濾，濾液備用。

④酵母菌等發酵菌體樣品：用醇堿皂化法提取，提取方法參考如下：

將濕菌體移入 150ml圓底燒瓶，加入 0.7g焦性沒食子酸、2.5g氫氧化鉀、19ml甲醇和7ml蒸餾水，混勻。90℃水浴鍋中回流 30min，迅速冷卻至室溫，倒入分液漏斗中，加入石油醚(正己烷、三氯甲烷或丙酮)等有機溶劑 40ml，劇烈震蕩 5min，萃取 CoQ10，連續萃取 2次，合并萃取液，用蒸餾水洗滌至中性，加入 5g無水硫酸鈉干燥。用旋轉蒸發儀 50℃濃縮至濃稠液，加入 10ml無水乙醇，放入冰箱冷凍析出膽固醇等雜質，過濾，濾液定容至 100ml待用。

3、CoQ10加樣：按照下表設置空白、標準和測定，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的 CoQ10濃度過高，可適當減少樣品用量或用 EC buffer稀釋后再進行測定。

4、 CoQ10測定：混勻，室溫避光孵育 3～5min，以空白管調零，比色杯光徑 1cm，分光光度計或酶標儀 620nm(600～640nm亦可)處測定標準管或測定管的吸光度。

計算：

液體樣品輔酶 Q10濃度：CoQ10(mg/ml)=A測定/A標準×0.5

液體樣品輔酶 Q10含量：CoQ10(mg)= A測定/A標準×0.5×VT

每 100g固體樣品輔酶 Q10含量：CoQ10(mg)= A測定/A標準×0.5×VT×100/m

式中：

A測定=測定管的吸光度

A標準=標準管的吸光度

0.5= CoQ10標準的濃度(mg/ml)

VT=CoQ10提取液的總體積(ml)

m=樣品的實際用量(g)

注意事項：

1、待測樣品中不能含有 CoQ10抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、在皂化過程中，震蕩不要劇烈，以免形成乳化層。

3、CoQ10 Assay buffer如果出現渾濁或絮狀物，應棄用。

4、CoQ10標準梯度應準確，盡量減少不必要的誤差。

5、EC solution有一定毒性，請小心操作。

6、檢測標準品時，按步驟 3表格混合后，2min內即出現明顯的藍色變化并逐漸加深，20min后藍色開始變淺，30min后逐漸呈黃綠色。630nm檢測數據表明，隨著時間的延長，OD值在不斷的下降，對應的顏色也已發生變化，特別是高濃度的標準品變化比較大。因此，應在出現最深的藍色結果且穩定的時間段內盡快檢測，而且建議每次同時檢測標準品 (0.3～0.5mg/ml)和樣品。如有條件，**用酶標儀檢測，減少因檢測時間導致的誤差。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。

附一：參考標準曲線范圍： Leagene測定 CoQ10標準 0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml在 630nm的吸光度，據此做出其標準曲線如下：

附二：CoQ10的提取方法(來源于網絡，僅供參考)方法一、醇堿皂化法皂化液的制備取豬心殘渣，壓干稱重，按干渣重加 300g/L工業焦性沒食子酸，攪勻，加醇-堿溶液(干渣重 3～3.5倍量乙醇、320g/L氫氧化鈉)，加熱攪拌回流 25～30min，迅速冷卻至室溫，得皂化液。

濃縮液的制備取皂化液，立即加入其體積 1/10量的石油醚或 120號汽油提取 3～4次，攪拌，分層，得提取液。水洗至近中性，在 40℃以下濃縮至原體積的 1/10，冷卻，-5℃以下靜置過夜，過濾，得濃縮液。

輔酶 Q10精制品的制備將濃縮液過硅膠柱層析，先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得黃色油狀物。加熱無水乙醇溶解，過濾，濾液靜置，冷卻結晶，真空干燥，得輔酶 Q10精制品。

方法二、醇醚混合溶劑提取法

輔酶 Q10粗制品的制備取豬心殘渣，加 1.5倍量的 V乙醇：V乙醚=3：1混合溶劑，加熱提取

3～4次，每次 15～20min，冷至室溫，過濾，合并提取液。濃縮，加適量水，加石油醚提取，提取液濃縮，濃縮物為黃色油狀物，即輔酶 Q10粗制品。

輔酶 Q10成品的制備取輔酶 Q10粗制品，加丙酮溶解，置-10℃以下析出雜質，過濾，濾液蒸去丙酮，加少量石油醚溶解，過硅膠柱層析分離，加無水乙醇結晶，得輔酶 Q10成品。